Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:03 мин. • February 2nd, 2026
Начните с культуры Agrobacterium tumefaciens , выращенной в среде, дополненной двумя антибиотиками для предотвращения загрязнения и обеспечения удержания плазмид.
Бактерии содержат экспрессионный вектор растений, несущий интересующий ген и ген устойчивости к антибиотикам.
Они также содержат вспомогательную плазмиду с областью генов вирулентности, необходимой для доставки интересующего гена в клетки растений.
Перенесите часть в пробирку с буферной средой, дополненной ацетосирингоном — молекулой сигнала растения и антибиотиками. Инкубировать с помощью встряхивания.
Ацетосирингон диффундирует в клетку, запускает сигнальный путь и активирует экспрессию генов вирулентности, необходимых для переноса интересующего гена.
Перенесите культуру, центрифугуйте для сбора бактерий и выбросьте супернатант.
Добавьте соляный буфер и многократно промывайте клетки, чтобы удалить добавленные антибиотики.
Суспензировать бактерии в буфере с помощью ацетосирингона и инкубировать без встряхивания для поддержания экспрессии гена вирулентности.
Используйте культуру немедленно для эффективного преобразования.
Используйте кончик, чтобы выделить положительную колонию из пластины LB и инокулировать клетки в стеклянную тр
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео