Исследование аутофагического очищения внутриклеточных бактерий in vitro

Возьмём культуры почечных клеток свиньи, при этом одна культура предварительно обработана ингибитором, повышающим pH лизосомы, ухудшая аутофагично-лизосомное разложение.

Добавьте патогенные бактерии и центрифугу для усиления контакта между хозяином и патогеном.

Инкубировать для обеспечения бактериального вторжения и внутренней интернации в эндоцитарные пузырьки.

Внутренние бактерии потребляют питательные вещества хозяина для репликации, вызывая метаболический стресс.

Этот стресс активирует аутофагию, когда аутофагическая мембрана расширяется вокруг везикулы, образуя аутофагосому.

В необработанных клетках аутофагосома нацеливается на бактерии для дезградации лизосом.

В клетках, обработанных ингибиторами, аутофагический клиренс нарушается, что приводит к увеличению бактериальной нагрузки.

После заражения промыйте клетки и нанесите антибиотик для уничтожения внеклеточных бактерий.

Добавьте фермент для переваривания внеклеточного матрикса и удаления клеток.

Механически лизируйте клетки, чтобы выпустить внутриклеточные бактерии.

Покройте лизаты в пластину, чтобы обеспечить рост бактерий.

Меньшее количество колоний из необработанных клеток подтверждает роль пути деградации аутофагии-лизосомного разложения в очищении внутриклеточных бактерий.