Обнаружение метаболитов фекалий человека с помощью бактериального биосенсора

Начните с бактериальной биосенсорной культуры, подвешенной в определённой среде.

Эти модифицированные бактерии производят транскрипционный фактор, который при связывании с определённым фекальным метаболитом активирует промотор, связанный с флуоресцентным репортерным геном.

К этой культуре добавьте фильтрованный образец фекалий человека, содержащий метаболиты, такие как лактат, которые участвуют во взаимодействии хозяина и микробиома.

Разведите эту смесь свежей средой, чтобы поддерживать оптимальный объём реакции.

Инкубировать без трясти, чтобы имитировать человеческую кишечную среду.

Фекальные метаболиты диффундируют в бактериальную клетку и связываются с транскрипционным фактором.

Этот комплекс связывается с промотором и приводит к экспрессии репортерных генов и выработке белка.

Смешайте раствор для равномерного распределения, разведите его в буфере и проанализируйте с помощью потоковой цитометрии.

Когда бактериальные клетки проходят через лазер, флуоресценция, излучаемая репортерными белками, подтверждает наличие специфического фекального метаболита.