Микрофлюидный анализ на основе фага для обнаружения жизнеспособных E. coli в образцах воды

Начните с загрязнённой воды, в которой, вероятно, содержатся фекальные колиформы, включая E. coli.

Проведите последовательное разбавление дистиллированной воды для снижения мутности и микробной нагрузки.

Смешайте нужный разбавленный образец с питательной средой и загрузите его в микрофлюидный чип.

Используйте вакуумную фильтрацию для захвата бактерий на мембране внутри серпантинного канала чипа.

Добавьте питательную среду в верхнюю камеру и инкубировать для улучшения восстановления бактерий.

Замените среду раствором фагов, специфичных для E. coli, несущего ген люциферазы.

Инкубировать для заражения фагов, при этом ДНК фага реплицируется, разрушает ДНК хозяина и формирует новые фаги вместе с выработкой люциферазы. Затем инфицированные клетки лизуются, высвобождая люциферазу.

Примените вакуумную фильтрацию для переноса люциферазы на захватную мембрану.

Добавьте подложку, которая реагирует с люциферазой, чтобы получить люминесцентный сигнал.

С помощью фотомультипликатора измеряйте люминесценцию, которая пропорциональна количеству жизнеспособных клеток E. coli в образце воды.