Wnt5A-опосредованный усиление бактериального клиренса в мышиных макрофагах

Возьмём культуру мышиных макрофагов.

Хорошо обрабатывайте тест буфером, содержащим Wnt5A, сигнальную молекулу, а управляющий элемент — только буфером.

Заразиться бактериальным патогеном и инкубироваться.

В тестовых клетках Wnt5A активирует сигнальный каскад, который усиливает реорганизацию цитоскелета для стимулирования поглощения бактерий фагосомами, тогда как контрольные клетки, не имеющие этой сигнализации, внутрьют меньше бактерий.

Промывайте для удаления неинтернированных бактерий, затем инкубируете с помощью среды с антибиотиками для уничтожения оставшихся внеклеточных бактерий.

Сигнализация Wnt5A готовит фагосомы, содержащие бактерии, к слиянию с лизосомами, что способствует разложению бактерий.

Некоторые бактерии выходят за счёт разрыва фаголизосом.

В контрольных клетках ограниченное созревание фагосом приводит к увеличению выхода.

Собирайте клетки в определённые временные точки. Добавьте дистиллированную воду для вызова осмотического шока, лиза клеток и высвобождение внутриклеточных бактерий.

Размазывайте лизаты на агаровых тарелках и инкубируете.

Подсчёт колоний для оценки большего временно-зависимого снижения бактерий в клетках, обработанных Wnt5A.