Оценка нарушенной презентации антигена MHC-I в иммунных клетках, инфицированных бактериями

Начните с культуры иммунных клеток, инфицированных патогенными бактериями, образующими внутриклеточные инклюзивные тела.

Бактериальная инфекция нарушает путь презентации антигена в иммунных клетках.

Возьмите неинфицированную культуру как контроль.

Далее добавьте модельный белковый антиген и инкубируете.

Иммунные клетки интернализируют, перерабатывают и представляют модельные антигенные пептиды на молекулах MHC-I.

После инкубации промыйте клетки, чтобы удалить необработанный антиген.

Зафиксируйте клетки, затем добавьте средство для нейтрализации фиксативного.

Введите инженерные CD8+ Т-клетки и инкубируете.

Эти клетки распознают фрагмент антигена, отображаемый на молекуле MHC-I, активируются и выделяют фермент, который служит маркером для презентации антигена, опосредованного MHC-I.

Далее добавьте субстрат, который реагирует с ферментом, создавая колориметрический сигнал.

Измерьте поглощение. Снижение поглощения в культуре инфицированных клеток по сравнению с неинфицированной культурой указывает на снижение эффективности презентации антигена MHC-I из-за бактериальной инфекции.