Оценка бактериальной вирулентности с помощью жидкостного токсичного теста C. elegans

Возьмём мульти-колодящую пластину с суспензиями непатогенной бактерии, выступающей в роли контроля, а также различные штаммы патогенных бактерий для оценки их относительной вирулентности.

Бактерии суспендированы в среде с ограниченным количеством питательных веществ, чтобы предотвратить чрезмерный рост и имитировать среду, способствующую инфекции.

Добавьте в каждую колодцу червей L4 стадии C. elegans и инкубируют пластину под непрерывным перемешиванием для усиления контакта между бактериями и червями.

Черви питаются бактериями, которые проникают в их кишечник и колонизируют его.

Патогенные бактерии выделяют токсины, повреждающие кишечные ткани, что приводит к системной токсичности и в конечном итоге гибели червей.

После инкубации подсчитайте живых червей в каждой колодце и составьте график для оценки их выживаемости.

Различия в показателях выживаемости червей отражают относительную вирулентность каждого штамма бактерий.

После культивирования штаммов Aeromonas и измерения их поглощения, как было описано, центрифугайте бактериальный бульон при 3 500 г в течение 15 минут. Отрегулируйте бактериальный бульон с помощью S Medium и добавьте 195 микролитров бактериального бульона в S-среде до восьми ямок на 96-колодной тарелке. Смойте черви с пластины ENGM средним средством M9. Затем отрегулируйте концентрацию червячного раствора до пяти червей на микролитр.

Добавьте по 5 микролитров червячного раствора в каждую колодцу пластины на 96 лунок. Инкубировать тарелку на шейкере и считать количество живых червей через 24, 48 и 72 часа.