JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:12 мин • February 26th, 2026
Начните с питательной среды для роста нематоды, содержащей газон патогенной бактерии Aeromonas.
Перенесите червей L4 стадии C. elegans , экспрессирующих мышечно-специфичный GFP, на бактериальный газон и инкубироваться.
Черви поглощают бактерии вместе с питательными веществами. Это позволяет бактериям проникать и колонизировать кишечник.
Используя специализированную систему секреции, Aeromonas доставляет факторы вирулентности в клетки кишечника червя.
Эти факторы вирулентности диффундируют по стенкам тела, где нарушают мышцы, вызывая структурные повреждения и некроз.
Ежедневно перемещайте червей на свежую тарелку с бактериальным газоном, чтобы поддерживать постоянное воздействие патогенов.
Поместите червей на агарозный гель, дополненный анестезизирующим агентом для анестезии, затем нанесите накладку.
Используя фильтр GFP, фиксируйте флуоресцентные изображения с регулярными интервалами.
Постепенная потеря сигнала GFP указывает на нарушение мышц у C. elegans, что представляет собой мышечный некроз при взаимодействии хозяина с патогеном, вызванный Aeromonas.
После культивирования штаммов Aeromonas и корректировки абсорбции согласно текстовому протоколу, найдите и распределите бактериальный бульон на пластинах NGM.
После этого переложите 50 червей L4 на каждую пластину NGM. Каждые 24 часа перемещайте червей на свежие пластины NGM. Случайным образом выберите 10 червей и перенесите их в 2% агарозный гель в среде M9 на слайде.
Наконец, разместите накладку на гель и сделайте мышечные изображения с помощью зелёного флуоресцентного белкового фильтра на люминесцентном микроскопе с камерой.