JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:11 мин • February 26th, 2026
Возьмите две тарелки с 3D-печатными альгинатными матрицами, каждая из которых содержит контрольные или тестовые бактериальные штаммы.
Оба штамма конституентно экспрессируют флуоресцентный белок для визуализации. Тестовый штамм также содержит индуцируемый ген для образования белковых внеклеточных волокон, называемых волокнами curli.
Узоры напечатаны на спального носителя, дополненном кальцием и рамнозой.
Инкубировать для того, чтобы ионы кальция могли скрепить альгинат, образуя гидрогель.
В испытательном штамме рамноза индуцирует образование субъединиц curli, которые самособираются на поверхности клетки в волокна.
Используйте люминесцентный сканер для изображения узоров.
Обрабатывайте кальцие-хелатным раствором и инкубируйте с помощью встряхивания для удержания ионов кальция, что нарушает сцепление альгинатов и растворяет гидрогель.
Откажитесь от решения и заново изобразите шаблоны.
Обработка вызвала растворение контрольного узора, в то время как пробный узор остался целым благодаря стабилизирующей сети волокон кудрявых.
Инкубировать напечатанные образцы при комнатной температуре в течение трёх-шести дней, чтобы получить компоненты биопленки, такие как волокна Curli.
Затем поставьте пластину на люминесцентный сканер и сделайте изображение пластин.
Для растворения матрици альгината добавьте 20 миллилитров раствора цитратного натрия с мольярным уровнем 0,5 моля при pH 7 в печатный субстрат, инкубуйте пластину при комнатной температуре в течение двух часов, встряхивая при 30 об/мин.
Затем сбросьте жидкость и снова снимите пластины, чтобы сравнить с изображениями пластин до и после обработки цитратом.