JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:23 мин • March 31st, 2026
Начните с ферментированных супернатантов, содержащих деградированные и недеградированные экзополисахариды, или EPS.
Эти EPS получаются во время ферментации, когда отдельные популяции фекальных бактерий в каждом супернатанте по-разному воздействуют на EPS.
Обнаружите супернатанты у основания тонкослойной хроматографической пластины, предварительно покрытой полярной стационарной фазой.
Высушите пластину на воздухе, затем поместите её в камеру с подвижной фазой с меньшей полярностью, чем стационарная.
По мере роста мобильной фазы EPS мигрируют в зависимости от своей полярности и размера.
Крупные, недеградированные EPS сильно взаимодействуют с неподвижной фазой и остаются рядом с началом координат.
Мелкие деградированные фрагменты слабо связываются и мигрируют вверх вместе с подвижной фазой.
Снимите пластину и высушите её на воздухе.
Погрузите пластину в реагент, окрашивающий углеводы, который реагирует с EPS.
Просушите пластину на воздухе, затем нагрейте, чтобы обезвожить EPS и получить цветные полосы.
Одна полоса рядом с началом подтверждает недеградированный EPS, тогда как несколько полос подтверждают деградацию EPS бактериями.
Загрузите 0,2 микролитра ферментированных супернатантов на каждую предварительно покрытую алюминиевую пластину 60 TLC и прокрутите для распределения. Затем используйте фен с горячим воздухом для сушки.
Погрузите один конец пробных пластин в 20 миллилитров мурьшиной кислоты:n-бутанол:водный раствор на несколько минут, пока электрофорез не распространится почти на другой конец. Затем достаньте пластины щипцами и высушите феном. Затем замочите тарелки в реагенте орцинола на две минуты, чтобы они снова высохли.
Перенесите тарелки в печь для выпечки при 120 градусах Цельсия, чтобы нагреть три минуты. Затем сделайте фотографии пластины, чтобы оценить деградацию EPS, измеряя диапазоны TLC.
В данном протоколе демонстрируется применение тонкослойной хроматографии (ТСХ) для оценки деградации бактериальных экзополисахаридов (ЭПС). Понимание процессов деградации ЭПС имеет решающее значение для изучения микробных взаимодействий и их влияния на экосистемы.
Тонкослойная хроматография (ТСХ) для профилирования деградации экзополисахаридов (ЭПС) позволяет биофармацевтическим группам исследовать углеводный обмен микроорганизмов с количественной точностью. Данная аналитическая возможность поддерживает валидацию мишеней на ранних стадиях и снижение механистических рисков при поиске терапевтических средств на основе микробиома. Надежная оценка деградации ЭПС повышает прогностическую достоверность последующего скрининга и трансляционных исследований.
Анализ деградации EPS на основе ТСХ является частью процесса от раннего поиска до идентификации ведущих соединений, обеспечивая как проверку гипотез, так и готовность к скринингу.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026