Проведение тонкослойной хроматографии для оценки деградации бактериальных экзополисахаридов

Начните с ферментированных супернатантов, содержащих деградированные и недеградированные экзополисахариды, или EPS.

Эти EPS получаются во время ферментации, когда отдельные популяции фекальных бактерий в каждом супернатанте по-разному воздействуют на EPS.

Обнаружите супернатанты у основания тонкослойной хроматографической пластины, предварительно покрытой полярной стационарной фазой.

Высушите пластину на воздухе, затем поместите её в камеру с подвижной фазой с меньшей полярностью, чем стационарная.

По мере роста мобильной фазы EPS мигрируют в зависимости от своей полярности и размера.

Крупные, недеградированные EPS сильно взаимодействуют с неподвижной фазой и остаются рядом с началом координат.

Мелкие деградированные фрагменты слабо связываются и мигрируют вверх вместе с подвижной фазой.

Снимите пластину и высушите её на воздухе.

Погрузите пластину в реагент, окрашивающий углеводы, который реагирует с EPS.

Просушите пластину на воздухе, затем нагрейте, чтобы обезвожить EPS и получить цветные полосы.

Одна полоса рядом с началом подтверждает недеградированный EPS, тогда как несколько полос подтверждают деградацию EPS бактериями.

Загрузите 0,2 микролитра ферментированных супернатантов на каждую предварительно покрытую алюминиевую пластину 60 TLC и прокрутите для распределения. Затем используйте фен с горячим воздухом для сушки.

Погрузите один конец пробных пластин в 20 миллилитров мурьшиной кислоты:n-бутанол:водный раствор на несколько минут, пока электрофорез не распространится почти на другой конец. Затем достаньте пластины щипцами и высушите феном. Затем замочите тарелки в реагенте орцинола на две минуты, чтобы они снова высохли.

Перенесите тарелки в печь для выпечки при 120 градусах Цельсия, чтобы нагреть три минуты. Затем сделайте фотографии пластины, чтобы оценить деградацию EPS, измеряя диапазоны TLC.