Таймлапс-визуализация сегрегации хромосом у флуоресцентно маркированных бактерий

Начните с богатой питательными веществами агарозной подушки на металлическом каркасе, содержащей бактерии, экспрессирующие флуоресцентно маркированные хромосомы и флуоресцентные микросферы.

Агарозная подушка поддерживает прикрепление и подвижность бактерий, а флуоресцентные микросферы служат ориентиром для отслеживания сегрегации хромосом.

Добавьте иммерсионное масло в объективную линзу в предварительно нагретой инкубационной камере инвертированного широкопольного микроскопа.

Разместите образец над линзой, затем сфокусируйтесь на области, содержащей несколько бактерий и как минимум одну флуоресцентную микросферу.

Инициировать таймлапс-съёмку и зафиксировать как фазово-контрастные, так и флуоресцентные изображения.

Флуоресцентно помеченное происхождение репликации появляется в виде яркого скопления возле одного конца клетки.

Во время деления происхождение дублируется; один кластер остаётся на исходном конце, а другой мигрирует к новообразованному концу клетки.

Такая система позволяет отслеживать сегрегацию хромосом в нескольких делениях и может быть адаптирована для визуализации аналогичных динамических процессов у других бактерий, включая патогенные виды во время взаимодействия с хозяином