Колонизация кишечника и индукция диареи с помощью Vibrio cholerae у взрослых данио-рерио.

Поместите взрослую данио-рерио в стерильную инфекционную воду и добавьте патогенный штамм Vibrio cholerae с нужной плотностью.

Накройте стакан перфорированной крышкой, чтобы рыбы не выпрыгнули и не насиживались.

Данио-рерио поглощает бактерии, которые попадают в кишечник, проходят через слизистый слой с помощью жгутиков и прилипают к эпителию.

Они колонизируют эпителий и выделяют токсины, нарушающие целостность кишечника, приводя к утечке ионов, жидкостей и белков.

Токсины также стимулируют секрецию эпителиальной слизи, способствуя сохранению бактерий.

Накопление жидкости, слизи и кишечного содержимого приводит к водянистой диарее, которую можно обнаружить по увеличению мутности воды.

После инкубации соберите рыбу и сбросьте заражённую воду в дезинфицирующее средство.

Переведите рыбу в стерильную воду для удаления поверхностных бактерий.

Соберите и снова переместите рыбу в стерильную воду для дальнейшего анализа.

После подготовки культур V. cholerae инокулируйте данио-рерио погружением в неё. Сначала поместите четырёх или пяти данио-рерио в стакан объемом 400 миллилитров, содержащий 200 миллилитров стерильной инфекционной воды. Затем добавьте 1 миллилитр культуры V.cholerae для желаемой концентрации инфекции.

Затем накройте стакан перфорированной крышкой. После приготовления всех стаканов перенесите их в стеклянный фронтальный инкубатор, установленный на 28 градусов Цельсия. Для кратковременного воздействия примерно через шесть часов вылейте воду из стакана через рыболовную сеть, чтобы собрать рыбу. Заражённую воду необходимо утилизировать в отбеливателе для уничтожения бактерий.

Затем поместите рыбу в 200 миллилитров стерильной воды против инфекции на пять минут. Через пять минут пропустите эту воду через рыболовную сетку, вылив её в отбеливателе. Теперь рыбу можно положить в новый чистый стакан с 200 миллилитрами стерильной воды от инфекции.