Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:42 мин. • February 26th, 2026
Начинайте с усыплённой мыши, инфицированной антибиотикоустойчивым бактериальным штаммом, который моделирует хроническую кишечную инфекцию.
Обнажите брюшную полость для доступа к слепной и селезёнке.
Извлеките ткани кекалий и селезёнки, которые представляют собой кишечные и системные участки колонизации бактерий.
Поместите каждую ткань в отдельную трубку с буфером и стальной шариком.
Гомогенизуйте ткань, быстро перемешивая трубки, вызывая столкновение стальных шариков с тканью, её разрушение и высвобождение бактерий в суспензию.
Проводите серийное разбавление гомогенатов в буфере для снижения концентрации бактерий.
Пластинчатые аликвоты из каждого разбавления на питательный агар с добавлением антибиотика для селективного восстановления устойчивых к антибиотикам бактерий.
Инкубировать пластины, чтобы жизнеспособные бактерии могли вырасти в колонии.
Подсчитайте колонии, чтобы оценить количество жизнеспособных бактерий на грамм ткани, и сравните бактериальную нагрузку в грудной и селезёнке.
Сначала разместите микротрубки с круглым дном с безопасным замком объемом 2 миллилитра, добавьте 1 миллилитр стерильного PBS и автоклавную бусину из нержавеющей стали в каждую трубку. Заранее взвесьте трубы перед сбором тканей.
После эвтаназии мышей удалять их ткани кекалий и селезёнки, обязательно собирая ткани отдельных животных в отдельные трубки. Взвесьте каждую трубку, чтобы определить вес тканей.
Используйте смесительный мельничный аппарат для гомогенизации тканей при 30 герц в течение 15 минут. Затем переведите 900 микролитров PBS в каждую скважину мегаблока объемом 2 миллилитра с 96 лунками. Пипет, 100 микролитров ткани, гомогенизируются в первую яму, и хорошо перемешиваются.
Проводите последовательные разбавления, добавляя 100 микролитров в последующие скважины, пока не получится разбавление 10 к минус шестой. Пластинка 10 микролитров каждого разбавления тройной разводится на LB-агар, содержащий стрептомицин. Затем подсчитайте среднее количество единиц формирования колонии и определите единицы формирования колонии на грамм ткани, как указано в текстовом протоколе.