Подготовка Gardnerella vaginalis Inoculum для моделирования рецидивирующих инфекций мочевыводящих путей у мышей

Посмотрите на антибиотикоустойчивый штамм G. vaginalis — анаэробную бактерию, связанную с инфекциями мочевыводящих путей у мышей.

Во время начальной инфекции мочевого пузыря уропатогенный E. coli формирует спокойные резервуары внутри эпителиальных клеток мочевого пузыря.

Последующее воздействие G. vaginalis вызывает токсичное выделение поверхностных клеток, позволяя спящему UPEC вновь появляться и вызывать рецидивирующие инфекции мочевыводящих путей.

Чтобы подготовить инокулюм G. vaginalis , нанесите его на питательную агаревую пластину без антибиотиков, чтобы обеспечить восстановление бактерий.

Инкубировать анаэробно, чтобы получить активно растущие колонии.

Перенесите петлю плотных колоний в бульон без антибиотиков.

Инкубировать статически в анаэробных условиях до достижения желаемой концентрации бактерий.

Измерьте оптическую плотность для оценки концентрации.

Перенесите суспензию в трубку, центрифугите для гранулирования бактерий, сбросьте супернатант и снова подвесьте в буфере.

Подготовьте серийные разведения и поместите их на среду с антибиотиками, чтобы обеспечить селективный рост G. vaginalis и предотвратить загрязнение. Посчитайте колонии, чтобы определить концентрацию инокуля.

Начните с цикла G. Vaginalis протягивается из морозильника при температуре минус 80 градусов Цельсия в анаэробную камеру. Разнесите бактерии на пластине NYCIII без антибиотиков. Инкубировать пластину при 37 градусах Цельсия анаэробно в течение 24 часов.

В анаэробной камере инокуляйте пять миллилитров анаэробной среды NYCIII с помощью петли объемом один микролитр клеток из пластины NYCIII и инкубируют культуру статически при 37 градусах Цельсия в анаэробных условиях в течение 18 часов. Не включайте антибиотики в форму роста. Определите_{OD 600} посева с помощью спектрофотометра.

Затем центрифугуйте её при давлении 9600 г в течение одной минуты и аспирируйте носитель. Суспензировать бактериальную гранулу в PBS до нужной концентрации и серийно разбавить и покрыть инокулум.