Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:17 мин. • March 31st, 2026
Начинайте с выращенного в биопленке Streptococcus pneumoniae — бессимптомного носоглоткового колонизатора, взвешенного в буфере
Интраназально вводите суспензию мыши без наркоза, что позволяет вдыхать её в верхние дыхательные пути.
В носоглоткельным эпителии бактерии создают биопленку, которая облегчает колонизацию и подавляет выработку противовирусных цитокинов клетками хозяина.
После анестезии вытяните язык мыши, чтобы добраться до трахеи.
Введите вирус гриппа А в трахею для заражения нижних дыхательных путей.
После выздоровления мыши немедленно внедрите вирус интраназально, чтобы нацелиться на верхние дыхательные пути.
Вирусная инфекция нарушает иммунную систему хозяина и повреждает слизистые ткани, вызывая распространение бактерий в нижние дыхательные пути.
В системе лёгких, изменённой вирусом, бактерии превращаются в инвазивные патогены, вызывая воспаление лёгких и системное распространение.
Инфекция также подавляет функцию нейтрофилов, снижая клиренс бактерий.
Эта модель коинфекции позволяет исследовать взаимодействия хозяина и микробов.
Разморозьте аликвоты, выращенные в биопленке, на льду и открутите при 1700 г в течение пяти минут. Аккуратно удаляйте и сбрасывайте супернатант, не нарушая гранулу. Затем промой гранулу, снова суспенируя её в 1 миллилитре PBS, и снова прокрути. Удалите супернатант и снова суспензируйте гранулу в нужном объёме для достижения нужной концентрации.
Инокуляция чёрной мыши C57 с шестью самцами интраназально 5 раз по 10 до шестой колониообразующих единиц или КФУ, вводя 5 микролитров разбавленной инокуляции в каждый нарис. После прививки держите мышь крепко, стабилизируя голову до вдоха объёма. После оттаивания вируса разведите его в PBS до нужной концентрации.
Перед анестезией нанесите глазную смазку на глаза мыши. Немедленно инфицируйте анестезиированную мышь 50 микролитрами 20 единиц образования бляшек (PFU) вируса гриппа А или IAV внутритрахеально, используя тупой пинцет, чтобы вытащить язык изо рта и прокачивать объём жидкости по трахее. После восстановления интраназально вводите 10 микролитров 200 ПФУ IAV с использованием описанного ранее метода прививки.