Почему проверка нулевой гипотезы важна для подсчета количества бактерий?

Проверка нулевой гипотезы при подсчете бактерий позволяет объективно оценить эффективность воздействия путем сравнения количества КОЕ в экспериментальных группах, что способствует валидации мишеней и прояснению механизмов в моделях инфекции.

Как изоляция независимых переменных вписывается в рабочий процесс коинфекции?

Изоляция таких переменных, как тип патогена или условия лечения, гарантирует, что изменения бактериальной нагрузки отражают конкретные экспериментальные манипуляции, что укрепляет выводы на этапе открытия и снижает влияние мешающих факторов.

Что позволяют определить количественные измерения КОЕ в доклинических исследованиях?

Количественное определение КОЕ обеспечивает точные показатели бактериальной нагрузки, что позволяет сравнивать тяжесть заболевания, оценивать эффективность вмешательства и принимать обоснованные решения о дальнейшем продвижении в рамках доклинических исследований.

Почему требования к воспроизводимости критически важны для кросс-функциональных команд?

Повторение процедур обработки и подсчета тканей обеспечивает достоверность данных, облегчает сравнение результатов между группами и служит основой для совместного принятия решений в междисциплинарных средах НИОКР.

Какие возможности статистического анализа необходимы перед проведением количественного определения КОЕ?

Надежный статистический анализ данных КОЕ, включая оценку дисперсии и сравнение групп, необходим для подтверждения результатов и получения практически значимых выводов в рабочих процессах биофармацевтических исследований.

Обработка инфицированных тканей для бактериального перечисления в модели коинфекции у мышей

JoVE Encyclopedia of Experiments

Микробиология

0 просмотров • 3:16 мин • March 31st, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Начните с мыши, соинфицированной патогенной бактерией и вирусом.

Вирус повреждает эпителиальную оболочку верхних дыхательных путей мыши, способствуя распространению бактерий из носоглотки в лёгкие.

Поместите собранные лёгкие мыши в чашу с сосемлявым раствором, содержащим фосфат-буферный раствор, или PBS.

Нарежьте лёгкие на мелкие кусочки и аккуратно перемешайте.

Перенесите половину легкой ткани в трубку с PBS.

Вставьте стерилизованный гомогенизатор тканей внутри трубки, содержащей ткань лёгких.

Гомогенизуйте ткань, чтобы выпустить бактерии в PBS.

Разведите гомогенат и разведите его на богатую питательными веществами агаровую пластину.

Инкубировать пластину для формирования бактериальных колоний.

Подсчитайте эти колонии, чтобы количественно оценить бактериальную нагрузку на лёгкие, которая отражает нагрузку бактерий в лёгких.

Для сбора лёгких с помощью ножниц для вскрытия срезать бока обнажённой грудной клетки и аккуратно подтянуть рёбра к голове мыши, чтобы обнажить сердце. Введите иглу 25-го калибра, прикреплённую к 10-миллилитровому шприцу, предварительно наполненному PBS, в правый желудочек и начинайте медленно перфузировать. Обратите внимание на обесцвечивание лёгких как на показатель успешной перфузии.

Промывайте медленно, чтобы не повредить лёгочную ткань. Поднимите сердце щипцами и сделайте разрез, чтобы разделить лёгкие и сердце. После разделения соберите все доли лёгких щипцем и прополосните в чашке стерильным PBS, чтобы удалить остатки крови.

В чашке Петри измельчите лёгкое на мелкие кусочки и хорошо перемешайте. Удалите половину смеси лёгких, чтобы определить бактериальный CFU или вирусный PFU, и поместите её в круглодонную трубку объёмом 15 миллилитров, предварительно заполненную 0,5 миллилитрами PBS для гомогенизации.

Чтобы гомогенизировать собранную ткань, очистите зонд гомогенизатора, добавив 70% этанола и включив гомогенизатор на мощности 60% на 30 секунд. Повторите этот шаг в стерильной воде в течение 10 секунд.

Гомогенизуйте каждую ткань на 1 минуту. Для перечисления бактериальных номеров — последовательные разбавления пластин на пластинах кровяных агаров. Для расчёта общего количества CFU используйте 10 микролитров для пластины и фиксируйте итоговый объём в миллилитрах для каждого образца. Инкубировать за ночь при 37 градусах Цельсия и 5% углекислого газа.