Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 4:02 мин. • February 26th, 2026
Возьмите среду с антибиотиком, блокирующим деление клеток.
Инокулируйте его палочкообразными, грамотрицательными бактериями.
Инкубировать с помощью встряхивания.
В присутствии антибиотика бактерии продолжают расти, не делясь, и образуют длинные нити.
Соберите культуру и центрифугуйте при низкой температуре. Сбросьте супернатант и промывайте филаменты раствором сахарозы, чтобы предотвратить лиз.
Отбросьте раствор сахарозы.
Добавьте буфер, затем ферменты и ЭДТА. ЭДТА ослабляет внешнюю мембрану, позволяя лизоциму проникнуть и разрушать слой пептидогликана.
Это удаляет клеточную стенку, позволяя бактериальной клетке уменьшиться. ДНКаза I разрушает высвобождённую хромосомную ДНК из клеток и предотвращает слипание клеток.
Добавьте гипотонический раствор с лёгким завитком, позволяя клетке втягивать воду.
Гибкие мембраны позволяют клетке принимать сферическую форму, называемую сферопластом.
Переместите аликвот со сферопластами в две трубки с охлаждённым изотоничным раствором для стабилизации сферопластов.
Для приготовления грамотрицательных E.coli сферопластов разведите ночную культуру в соотношении 1 к 100 в 25 миллилитрах TSB в колбасе объемом 250 миллилитров и вернуте бактерии в трясущий инкубатор
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео