Создание мышиной модели вагинальной стрептококковой инфекции группы B

Возьмём культуру группы B Streptococcus или GBS, оппортунистического бактериального патогена.

Разведите культуру в свежих средах и инкубируете, чтобы получить активно делящиеся бактерии.

Перенесите культуру в коническую трубку.

Центрифуга, чтобы пеллетировать бактерии, затем выбросить супернатант.

Промой бактерии буфером.

Снова центрифугировать, удалить супернатант и вернуть бактерии в буфер.

Далее используйте самок, обработанную гормонами, с подготовленным вагинальным эпителием, более подверженной инфекциям.

Сдержите мышь. С помощью тонкого наконечника пипетки введите подвеску GBS во влагалищный просвет.

Отпустите мышь, поднимите хвост и дайте передним лапам идти по твёрдой поверхности.

Это способствует удержанию инокулума во влагалищном просвете, обеспечивая адреза GBS.

Осмотрите отверстие во влагалище на наличие обратного оттока инокуля.

Прилипшие бактерии колонизируют поверхность эпителия влагалища и вызывают инфекцию.

Модель мыши с вагинальной инфекцией готова к дальнейшим исследованиям.

В тот же день инъекции выращивают пятимиллилитровую жидкую культуру штамма GBS, интересующего в бульоне Тодда Хьюитта, или THB, при температуре 37 градусов Цельсия.

На следующее утро субкультурировать GBS в объеме от 1 до 10 в свежем THB для двух-трёх часов инкубации при 37 градусах Цельсия, пока бактерии не достигнут средней фазы логарифма. Затем переместить субкультуру в стерильную коническую трубку объёмом 15 миллилитров и центрифугировать бактериальные клетки. Суспензировать гранулу в 200 микролитрах стерильного PBS.

Затем увеличите общий объём подвески до 1 миллилитра PBS на 10 мышей, чтобы получить_{OD 600} 0,4 в новой 5-миллилитровой трубке для культуры. Перенесите культуру в новую трубку объёмом 15 миллилитров и заново пеллетуйте бактерии. Затем подвесьте ячейки в PBS на одной десятой от исходного объёма.

Зарезервируйте 50 микролитров бактерий для серийного разведения и нанесения на THB-агар, чтобы определить точное количество ХФУ инокуля. Затем набрать 10 микролитров GBS в гелевой наконечник пипетки объёмом 200 микролитров и вручную закрепить обвисшую кожу на загриве на шее первого животного между большим и указательным пальцами, после чего обездвижите хвост. Введите кончик пипетки на 5–10 миллиметров в просвет влагалища и выпустите весь объём инокулума.

Затем сразу отпустите загривку и поднимите хвост, чтобы поднять заднюю часть животного, при этом передвигая передние лапы по твёрдой поверхности. Через минуту визуально осмотрите отверстие во влагалище на наличие обратного потока инокуля.