Количественная оценка нагрузки стрептококка группы B во влагалищном просвете мыши с помощью мазка и хромогенной культуры

Возьмём самку мыши, колонизированную вагинально стрептококком группы B или GBS — оппортунистическим бактериальным патогеном влагалищного тракта.

Сдержите мышь и введите буферно-увлажнённый тампон в просвет влагалища.

Аккуратно поворачивайте тампон, немного давите на стенку влагалища, чтобы вывести бактерии, прилипшие к поверхности.

Окуните тампон в буфер и перемешайте, чтобы подвесить бактерии.

Последовательно разведите суспензию в буфере и поместите её на хромогенный дифференциальный агар с субстратом, связанным с хромогеном.

Инкубировать для роста бактерий.

Во время инкубации GBS экспрессирует специфический фермент, гидролизующий хромогенный субстрат.

Высвобождённый хромоген подвергается спонтанному окислению и димеризации, образуя соединение розового или лилового цвета.

Это приводит к образованию розовых или лиловых колоний GBS, визуально отличающихся от других бактериальных колоний.

Посчитайте колонии, чтобы количественно оценить нагрузку GBS и оценить её устойчивость в модели мыши.

Непосредственно перед взятием мазка предварительно смочите хлопок в PBS и удержите одну из мышей, как только что было показано.

Введите мазок на 10 миллиметров в просвет влагалища и аккуратно вращайте четыре раза по часовой стрелке и четыре раза против часовой, при этом немного давите на стенку влагалища.

Поместите мазок в микроцентрифугу объёмом 1,5 миллилитра с 100 микролитрами PBS, и проведите вихрь в трубке и мазке примерно на 15 секунд, чтобы вывести бактерии из хлопковых волокон. Затем последовательно разбавьте каждый образец в PBS и разместите 20 микролитров с 1–10–1 до 10 до 10 000 разбавлений на дифференциальную среду агарную пластину, подготовленную по инструкции производителя, для инкубации при 37 градусах Цельсия в течение 24 часов. Колонии GBS выглядят ярко-розовыми или лиловыми по цвету.