Количественная оценка подавления биопленки, вызванной ферментами, у патогенных бактерий

Возьмите микропластину с контрольными и лечебными колодцами, каждая из которых инокулена патогенной бактерией, образующей биопленку.

В лечебных скважинах содержатся фермент, нарушающий образование биопленки.

Инкубировать в микроанаэробных условиях для создания среды с низким содержанием кислорода. Это способствует секреции бактериальных сигнальных молекул, которые обеспечивают адгезию поверхности. В лечебных скважинах фермент разлагает эти молекулы, тем самым снижая прикрепление бактерий.

Промыйте колодцы, чтобы удалить неприлипающие клетки.

Введите свежую среду и инкубируете. Приклеенные бактерии размножаются и выделяют внеклеточные полимерные вещества, которые образуют биопленочный матрикс.

Снимите медиум и помойте колодцы.

Добавьте катионный краситель и инкубируете, чтобы обеспечить связывание с отрицательно заряженными биопленочными компонентами.

Помойте, чтобы удалить незавязанную краску.

Инкубировать растворитель под перемешиванием, чтобы выпустить связанный краситель в раствор.

Измерьте оптическую плотность или перегрузку для количественной оценки биомассы биопленки.

Снижение OD в очищающих скважинах отражает снижение образования биопленки, вызванное нарушенной начальной адгезией клет