Микроскопическая оценка ингибирования образования биопленки, опосредованной ферментами

Начните с двух микротарелок с стеклянным дном, содержащих суспензии бактерии, образующей биопленку.

В лечебной антенне используется активный фермент, нарушающий сигнализацию, а в контроле — инактивированный фермент.

Накройте чашки и инкубируете, чтобы бактериальные прилипали к поверхности микротарелки.

Промыть, чтобы удалить не прилипающие клетки, затем ввести свежую среду с ферментами и инкубировать.

В контрольной антенне бактерии общаются через сигнальные молекулы и производят внеклеточные полимерные вещества (EPS), образуя биопленку.

Активный фермент разрушает сигнальные молекулы, нарушая их функцию и снижая образование биопленки.

Пополните его свежим средством и дополнительно инкубируете, чтобы усилить эффект фермента, разрушающий биопленку.

Удалите среду, добавьте флуоресцентно маркированные лектины и инкубируете, чтобы обеспечить связывание лектина с EPS.

Промыть, чтобы удалить незавязанный лектин.

Инкубировать с фиксативом для сохранения биопленочной архитектуры, затем промыть чашу.

Получить изображения конфокальной микроскопии для оценки подавления образования биопленки, опосредованного ферментами.

Для проведения конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM) биопленок A. bauman