Обнаружение сахаробактерий в бинарной культуре с помощью полимеразной цепной реакции

Начните с культуры Actinomyces , инфицированной сахаробактериями.

Сахарибактерии, ультрамаленькая паразитарная бактерия, и её хозяин образуют двойную культуру.

Добавьте аликвот инфицированной культуры в ПЦР-пробирку с реагентами для амплификации с красителем для отслеживания электрофореза и специфическими праймерами, специфическими для Saccharibacteria.

Поместите трубку в термоциклер с установленными условиями ПЦР.

Во время начальной денатурации тепло лизирует сахаробактерии, высвобождая геномную ДНК. Актиномицы остаются целыми из-за жестких клеточных стенок, ограничивающих высвобождение ДНК хозяина.

Затем тепло денатурирует цепи ДНК сахаробактерий и активирует Taq-полимеразу.

Во время отжига праймеры связываются с комплементарными последовательностями генома Saccharibacteria.

В дополнение Taq-полимераза добавляет dNTP к праймерам, синтезируя новые цепи ДНК.

Загрузите амплифицированный продукт ПЦР на агарозный гель, предварительно окрашенный красителем, который связывается с фрагментами ДНК.

Проведите электрофорез и визуализируйте гель под ультрафиолетовым светом.

Специфическая ампликонная полоса для Saccharibacteria подтверждает взаимодействие хозяина и паразита в бинарной культуре.

Аликвот