Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:06 мин. • February 26th, 2026
Начните с культуры Actinomyces , инфицированной сахаробактериями.
Сахарибактерии, ультрамаленькая паразитарная бактерия, и её хозяин образуют двойную культуру.
Добавьте аликвот инфицированной культуры в ПЦР-пробирку с реагентами для амплификации с красителем для отслеживания электрофореза и специфическими праймерами, специфическими для Saccharibacteria.
Поместите трубку в термоциклер с установленными условиями ПЦР.
Во время начальной денатурации тепло лизирует сахаробактерии, высвобождая геномную ДНК. Актиномицы остаются целыми из-за жестких клеточных стенок, ограничивающих высвобождение ДНК хозяина.
Затем тепло денатурирует цепи ДНК сахаробактерий и активирует Taq-полимеразу.
Во время отжига праймеры связываются с комплементарными последовательностями генома Saccharibacteria.
В дополнение Taq-полимераза добавляет dNTP к праймерам, синтезируя новые цепи ДНК.
Загрузите амплифицированный продукт ПЦР на агарозный гель, предварительно окрашенный красителем, который связывается с фрагментами ДНК.
Проведите электрофорез и визуализируйте гель под ультрафиолетовым светом.
Специфическая ампликонная полоса для Saccharibacteria подтверждает взаимодействие хозяина и паразита в бинарной культуре.
Аликвот 24 микролитра мастер-микса ПЦР в трубку объемом 0,2 миллилитра. На одном микролитре сахаробактерийной культуры и поместите трубку в термоциклер.
Установите программу ПЦР так, как описано в рукописи текста. Загрузите и запустите ПЦР-продукты на геле Agros 1%. Полоса из примерно 600 оснований подтверждает наличие сахаробактерий.