Почему антибиотикотерапия имеет решающее значение для выделения внутриклеточных бактерий?

Антибиотикотерапия уничтожает внеклеточные бактерии, гарантируя, что для последующей валидации мишеней и скрининговых приложений будут выделены только интернализированные патогены.

Как лизис клеток хозяина способствует выделению бактерий?

Лизис макрофагов ледяной водой высвобождает интернализованные бактерии в лизат, что позволяет отделить их от клеточного дебриса с помощью центрифугирования и фильтрации.

Какое количественное измерение подтверждает успешное восстановление бактерий?

Количество целых бактерий, захваченных фильтром с порами 0,45 мкм, служит количественным показателем выхода для оценки эффективности изоляции и стандартизации анализа.

Почему требования к воспроизводимости важны для межфункционального взаимодействия?

Последовательное воспроизведение протокола выделения обеспечивает сопоставимость бактериального материала для групп по поиску новых мишеней, скринингу и доклиническим исследованиям, что способствует надежной передаче данных и принятию решений.

Какой статистический анализ необходим перед внедрением этого метода изоляции?

Перед внедрением требуется анализ показателей восстановления бактерий и их вариабельности между повторностями для установления приемлемых пороговых значений робастности анализа и готовности к скринингу.

Выделение внутриклеточных патогенных бактерий из инфицированных клеток хозяина

JoVE Encyclopedia of Experiments

Микробиология

0 просмотров • 3:41 мин • February 26th, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Возьмём суспензию патогенных бактерий.

Добавьте суспензию в приклеенную культуру макрофагов или клеток BMDM, полученных из костного мозга, и инкубируете.

Бактерии используют свои поверхностные белки для связывания с рецепторами клеток хозяина, что способствует их прикреплению.

Прополосните буфером, чтобы удалить не прилипшие бактерии.

Добавьте свежие материалы и инкубируете.

Прилипшие бактерии затем внутрь поглощаются клетка-хозяином.

Добавьте антибиотик для уничтожения неинтернализированных бактерий.

Сбросьте медиа и смойте с помощью буфера.

Добавьте охлаждённую воду, чтобы лизировать клетку-хозяина, высвобождая содержимое клеток, ядро и внутренние бактерии.

Соберите лизат клетки и центрифугите для осаждения клеточных обломков.

Соберите супернатант, содержащий бактерии. Пропустите его через фильтрационное устройство для захвата целых бактерий.

Сложите фильтрующую бумагу и положите её в трубку.

Мгновенная заморозка в жидком азоте для сохранения целостности клетки.

Храните в холодных условиях для дальнейшего использования.

Используя 0,5 миллилитра промытой бактериальной суспензии, инфицируйте каждую пластину макрофага. Если используете несколько пластин, размещайте инфекции с интервалом в 15 минут, чтобы можно было собирать каждую пластину по отдельности в конце инфекции. После 30-минутной инкубации при 37 градусах Цельсия используйте PBS, чтобы дважды промыть инфицированные клетки и удалить отключённые бактерии, а затем добавьте 30 миллилитров предварительно нагретой BMDM-среды.

Инкубировать 30 минут, чтобы бактерии могли внутреннее рассеяться. Через час после заражения добавьте гентамицин в конечную концентрацию 50 микрограммов на миллилитр, чтобы уничтожить оставшиеся внеклеточные бактерии. Собрать фильтрующий аппарат, разместив фильтрующую головку на колбу для сбора жидкости с вакуумным выходом.

Затем установите фильтр диаметром 0,45 микрона на головку фильтра, затем воронку цилиндра и используйте металлический зажим для закрепления различных частей. Через шесть часов после заражения осмотрите монослой клетки под микроскопом перед сбором. Работая с одной тарелкой за раз для сбора бактерий, используйте PBS для промывки заражённых клеток.

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 15 августа 2026

Выделение внутриклеточных патогенных бактерий из инфицированных клеток хозяина

Обзор

Основные компоненты исследования

Область науки

Теоретические сведения

Цель исследования

Используемые методы

Основные результаты

Выводы

Часто задаваемые вопросы

Практическая значимость для промышленности

Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках

Ранний поиск и валидация мишени

Скрининг и разработка анализа

Трансляционные и доклинические исследования

Интеграция конвейеров и рабочих процессов

Операционное и корпоративное влияние

Особенности реализации

Часто задаваемые вопросы по биофармацевтике

Оценка бактериального вторжения сердечных клеток в культуре и колонизации сердца у инфицированных мышей с использованием листерий моноцитогенов

Изоляция Salmonella typhimurium-содержащих Phagosomes от макрофагов

Изоляция одной внутриклеточных бактериальных сообществ, генерируется из мышиных модели инфекции мочевыводящих путей анализа течению одноклеточного

Вторжение клеток человека от бактериальных патогенов

Очистка Возбудитель вакуоли с Legionella-Инфицированных Фагоциты

Исследование аутофагического очищения внутриклеточных бактерий in vitro

Извлечение лизата клетки-хозяина из инфицированных клеток-хозяев, культивируемых в проницаемой мембранной системе

Послушный млекопитающих инфекции сотовый с Протозойные грунтовка бактерии

Визуализация InlC секрецию по расследованию сотовой инфекции по бактериальным патогеном листерий

Открытие новых внутриклеточных патогенов на Amoebal сокультивирования и подходов Amoebal обогащению