Экстракция РНК из Listeria monocytogenes , собранная из инфицированных мышиных макрофагов

Возьмите трубку с фильтрующей бумагой, содержащей Listeria monocytogenes. Эти бактерии получают из инфицированных мышиных макрофагов.

Добавьте буфер с ингибиторами РНаз, чтобы предотвратить деградацию РНК, затем закрутите трубку под несколькими углами, чтобы вытеснить бактерии.

Центрифугировать и перенести суспензию в трубку с смесью фенол-хлороформ–детергентное средство.

Вихрь и инкубация при повышенной температуре, чтобы разрушить мембраны бактерий, инактивировать белки и лизировать бактерии, высвобождая внутриклеточные компоненты.

Центрифуга отделяет водную фазу, богатую РНК, от других компонентов.

Соберите РНК и перенесите её в трубку с ацетатом натрия и этанолом.

Вихрь, затем инкубировать при низкой температуре.

Ацетат натрия нейтрализует отрицательный заряд РНК, тогда как этанол и холодные условия способствуют осадке РНК.

Центрифуга для пеллетирования РНК.

Удалите супернатант и промойте гранулу холодным этанолом.

Снова центрифугайте, удалите супернатант, высушите на воздухе и добавьте воду без РНаз.

Храните РНК для дальнейшего анализа.

Разморозьте трубки с фильтрами на льду, чтобы они оставались холодными. Затем в каждую трубку добавьте 650 микролитров холодного ацетатного буфера EDTA ил