Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:18 мин. • March 31st, 2026
Начните с культивирующей пластины, содержащей изолированные колонии почвенной бактерии.
Соберите и прививите колонию в фляжку с питательной средой.
Инкубировать культуру с помощью встряхивания.
Фляга с замыканием имеет внутренние гребни, увеличивающие турбулентность при встряхивании, усиливая аэрацию.
Этот процесс обеспечивает равномерное распределение кислорода и предотвращает слипание клеток и осадкоотделение, обеспечивая равномерное распространение питательных веществ.
Бактерии быстро размножаются, образуя плотную суспензию из клеток, обладающих равномерными физиологическими характеристиками.
С регулярными интервалами собирайте образец в кюветте.
С помощью спектрофотометра пропустите свет через образец. Количество передаваемого света измеряется для количественной оценки роста бактерий, что называется оптической плотностью или OD.
Выберите бактериальные культуры в экспоненциальной и ранней стационарной фазе, поскольку клетки на этой стадии высокометаболически активны и, следовательно, наиболее восприимчивы к эффективной инфекции бактериофагами.
Клетки Arthrobacter культивируются из колоний, размещённых на пластине ЛБ, инкубируются при 30 градусах Цельсия в течение двух-трёх дней.
Используйте стерильную петлю, чтобы выбрать колонию, и добавьте её в 50 миллилитров бульона LB в термофляге с запутанной культурой. Инкубировать колбу в трясущем инкубаторе при 225 об/мин при 30 градусах Цельсия примерно 24 часа, чтобы получить экспоненциальные или раннестационарные клетки для экспериментов с фаговыми инфекциями.
Внимательно следите за состоянием роста бактерий, чтобы предотвратить переход клеток в средний и поздний стационарный рост. ИдеальныйOD 600 для выделения фагов составляет от 0,5 до 0,7.