Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:06 мин. • March 31st, 2026
Начните с обездвиженного, вскрытого мышиного мочевого пузыря, предварительно инфицированного β-галактозидазой уропатогенным кишечным палочкой, помещённого в многоколодчатую пластину с силиконовым покрытием.
Просвет мочевого пузыря обращён вверх, обнажая эпителиальные клетки, содержащие внутриклеточные бактериальные сообщества (IBC).
Промыйте мочевой пузырь буфером, чтобы удалить мусор и не прикреплённые бактерии.
Далее добавьте фиксирующее средство и инкубируете, чтобы сохранить клеточные и бактериальные структуры.
Снимите фиксатор и стирайте буфером.
Затем промыйте с помощью буфера с моющим средством для проникновения клеточных и бактериальных мембран.
Удалите буфер, затем добавьте раствор X-гал — субстрата из β-галактозидазы, дополненного редокс-реагентами, и инкубируете.
X-gal и редокс-реагенты попадают в бактерии. β-галактозидаза расщепляет X-гал, образуя бесцветный промежуточный продукт, который окисляется редокс-реагентами для образования синего осадка.
Под дисекционным микроскопом синие точки в мочевом пузыре подтверждают наличие IBC, что указывает на инфекцию мочевыводящих путей.
Для перечисления IBC, после извлечения мочевого пузыря, поместите его в силиконовое покрытие в шести-луночную пластину с PBS и с помощью ножниц разрежьте пополам.
Используя маленькие металлические штифты, расположенные вдоль самых внешних краёв, аккуратно расправьте мочевой пузырь так, чтобы просвет был обращён вверх, а максимальное количество уротела было открыто. После нанесения окрашивания LacZ, как указано в текстовом протоколе, наблюдайте IBC, которые выглядят как синие пункты под расщепляющим микроскопом.