JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:40 мин • March 31st, 2026
Начните с анестезированной мыши с крышкой чашки Петри под брюшком, чтобы удерживать спину горизонтально.
У мыши ожог на спине, инфицированный Acinetobacter baumannii — грамотрицательным бактериальным патогеном.
Бактерии генетически модифицированы для передачи биолюминесцентного оперона.
Разместить мышь в камере биолюминесценции с оптимальной температурой и начать съёмку.
В месте заражения гены luxA и luxB биолюминесцентного оперона кодируют фермент люциферазы. Гены luxCDE кодируют ферменты, синтезирующие субстрат люциферазы.
Люцифераза катализирует окисление субстрата и производит видимый свет, делая бактерии светящимися.
Сигнал биолюминесценции указывает на наличие метаболически активных бактерий в месте раны.
С помощью программного обеспечения для визуализации количественно определите интенсивность сигнала биолюминесценции, чтобы оценить жизнеспособную бактериальную нагрузку.
Сразу после прививки проведите биолюминесцентную визуализацию, запустив программное обеспечение для живой визуализации. В панели управления нажмите «Инициализировать». Затем дождитесь, пока цвет температурного шкафа не станет зелёным, что означает, что температура ступени в камере образца достигла 37 градусов Цельсия.
Поместите анестезированную мышь на тёплую сцену в камере образца, а инфицированные ожоги опустят прямо под камеру. Далее, в панели управления поставьте галочку рядом с «Люминесценция».
Затем выберите «Автоэкспозицию», чтобы время экспозиции для съёмки было оптимизировано программным обеспечением живого изображения с учётом интенсивности биолюминесценции. Выберите «C» из выпадающего списка «Поле зрения». Выберите опцию сканирования среднего диапазона, чтобы программное обеспечение определило фокусное расстояние.
Затем поставьте галочку рядом с наложением. Теперь нажмите «Приобрести», чтобы запечатлеть изображение. Затем в поле «Редактировать метку изображения» нажмите OK. Появятся «Окно изображений» и «Палитра оплаты». Задайте параметры Auto-ROI для автовыбора.