Модель параллельного потока пластин in vitro для изучения бактериальной адгезии на биопсии ткани

Начните с перфорированного микроскопического стекла и нанесите круговую биопсию ткани на перфорированную область.

Далее наденьте резиновую прокладку.

Переверните и вставьте этот узел в нижнюю часть рамы металлической камеры перфузии.

Выровняйте верхнюю раму с нижней и закрепите их.

Используйте суппорт для подтверждения одинаковой высоты камеры.

Камера подключена к насосу, который, в свою очередь, подключается к резервуару с бактериями, подвешенными в буфере.

Начинайте перфузию бактериальной суспензии в камеру.

Центральная перфорация в затворе позволяет бактериальной суспензии попасть в сборку.

Это способствует взаимодействию между бактериями и поверхностью ткани, способствуя адгезии и колонизации.

Такая схема генерирует модель in vitro , имитирующая in vivo бактериальную колонизацию ткани.

Для начала протокола разместите заранее подготовленную биопсию ткани диаметром 10 миллиметров, с такой же толщиной между стеклом микроскопа и восьмимиллиметровой круглой перфорацией, а также резиновую прокладку с внутренней поверхностью, направленной вверх, чтобы контактировать с бактериальной суспензией.

Сосредоточьтесь на ориентации пересадки ткани во время размещения в держателе. Убедитесь, что внутренняя поверхность ткани уже открыта для контакта с вашей экспериментальной средой.

Затем вставьте держатель с тканью в прокладку, встроенную в нижний металлический каркас камеры.

Прикрепите верхнюю металлическую раму с соответствующим прокладочным листом к нижней части камеры с ранее вставленным держателем для тканей. Затем закрепите всю камеру восемью винтами и гайками. Убедитесь, что высота камеры всегда одинакова между графтами с помощью суппорта или линейки.

Далее соедините камеру потока с перистальтическим насосом. Затем подключите 400-миллилитровый резервуар жидкости к трубкам. Пропустите ткани с помощью 100-миллилитровых суспензий десяти до семи флуоресцентно меченых колоний, образующих единицы в фосфатно-буферном соле, с чистым напряжением в три дина на квадратный сантиметр и соответствующей скоростью потока четыре миллилитра в минуту в течение одного часа с использованием перистальтического насоса и бактериального резервуара. Непрерывно циркулируйте бактериальную суспензию объёмом 100 миллилитров, используя тот же резервуар.