JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:15 мин • March 31st, 2026
Начните с роста саженцев кукурузы в контролируемых условиях, чтобы служить хозяевами.
Далее возьмём Agrobacterium tumefaciens, патогенную бактерию растений.
Модифицированные бактерии несут T-ДНК-конструкцию, кодирующую рекомбинантный вирусный геном. Этот геном содержит вставленный фрагмент гена, предназначенный для подавления целевой гена кукурузы.
Вводите бактерии чуть выше колеоптилярного узла, самого низкого узла растения, пока суспензия не заполнит колеоптил, обеспечивая доставку во внутренние ткани.
В месте инъекции бактерии переносят Т-ДНК, несущую вирусный геном, в клетки кукурузы, где она транскрибуется в вирусную РНК, проходящую в цитоплазму.
РНК размножается и запускает производство вирусного белка, образуя новые вирусные частицы, которые системно распространяются для установления инфекции.
Вирусная РНК, несущая нужный фрагмент гена, активирует механизм интерференции РНК растения, разрушая специфические мРНК кукурузы и заглушая целевой ген.
Это приводит к видимым изменениям в фенотипах, регулируемых целевой геном по мере роста инфицированных растений, например, к образованию некротических поражений, что подтверждает успешное заглушание генов.
Используйте сеянцы кукурузы возрастом 4–7 дней для инъекции Agrobacterium. Собери шприц и иглу. Аккуратно вводите бактериальную суспензию на 2-3 миллиметра выше колеоптилярного узла, пока она не заполнит колеоптиль или не станет видна в мутро, в зависимости от стадии роста растений.
Вводите все всады и меняйте шприц и иглы для каждого конструкта. Подтвердите фенотипическую инфекцию, наблюдая поражения, вызвавшие заглушание контрольных генов, поражения имитации 22 или фитоен-десатуразу на листьях.