Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:30 мин. • February 26th, 2026
Начните с биоанализных пластин: одна предварительно заселена с левой стороны агара питательными веществами Corynebacterium propinquum , а другая содержит только питательный агар.
Далее возьмите многоколодическую пластину с патогенной суспензией Staphylococcus .
Опустите штамп для инокуляции в колодцы, кончики которого погружаются в культуру Staphylococcus .
Прокрутите штамп, затем поднимите его и убедитесь, что на каждом кончике есть равномерная капля, чтобы обеспечить равномерное прищепление.
Выровняйте штамп с правой стороной пластины биоанализа, избегая контакта с существующими колониями.
Снимите штамп, оставив на агаре пятна Staphylococcus inoculum.
Повторяйте штампование только на пластине агара, чтобы получить монокультуру. Инкубировать тарелки вверх ногами.
В кокультуре C. propinquum выделяет сидерофоры — небольшие молекулы, которые поглощают железо из агара, тем самым подавляя рост стафилококка .
После инкубации сравните рост стафилококка в кокультуре и монокультуре.
Значительное торможение в кокультуре указывает на взаимодействие между двумя видами.
После шестидневной инкубации биоанализной пластины подготовьте ночные культуры целевого организма, как было описано ранее. Подготовьте тарелку, заполняя каждую яме пустой пластины на 12 лунок 1,8 миллилитра BHI и 200 микролитрами ночной культуры. Поставьте стерильный штамп для вакцинации на целевую пластину.
Аккуратно перемещайте культуры вокруг колодцев, чтобы они не загрязняли соседние колодцы. Поднимите штамп для вакцинации и убедитесь, что на каждом кончике штампа есть капля разбавленной культуры. Поместите штамп для инокуляции на невакцинированную биоанализную пластину и аккуратно покачивайте штамп так, чтобы капля культуры прививала каждую колодцу.
После снятия печати в колодцах должна быть видна капля культуры. Если ни одна скважина не инокуляцирована, нанесите на колодцы 3 микролитра разбавленной ночной культуры с помощью пипетки. Затем инокулируйте биопроанализные пластины, как было описано ранее, но выровняйте кончики штампы с правой стороной пластины с 12 лунками, чтобы штампа не соприкоснулась с существующей бактериальной колонией. Аккуратно снимите штамп и поставьте его обратно в мишень.
Если агар неравномерно затвердел в колодцах, аккуратно покачивайте штамп взад-назад, но будьте осторожны, чтобы не сдвинуться в рост тестируемого организма.
Повторяйте инокуляцию для каждой биоанализной пластины, пока все пластины не будут инкубированы, затем инкубируете пластины вверх ногами при нужной температуре в течение семи дней.
После недели совместной культуры теста и целевой организма оценивайте взаимодействия на основе визуальной оценки. Оцените колодцы с ростом целевого организма, который демонстрирует неразличимый рост по сравнению с монокультурой, как нулевый. Оцените колодцы с пониженным ростом как один, а без роста — как два.