Оценка колонизации кореней томатов патогенной бактерией с использованием жизнеспособного количества клеток

Возьмите контейнеры с рассадами томатов, выращенными на стерильном песке.

Корни саженцев инокулизированы либо дикой дикой формой, производящей целлюлозу, либо мутационным штаммом растительно-патогенной бактерии.

Удалите герметичный материал из одного контейнера, переверните его на стерильной бумаге и постучите, чтобы освободить песочный баллон с растением.

Разделите песочный цилиндр вдоль, чтобы открыть корень.

Затем окуньте корень в стерильный буфер и потрясете, чтобы удалить слабо прикреплённые бактерии.

Повторите процесс для другого корня.

Перенесите вымытые корни в свежий буфер. Соникуйте их, чтобы выпустить плотно прилипшие бактерии.

Используйте эти звуковые суспензии для подготовки последовательных разбавлений, покройте их на агаре и инкубируете, чтобы жизнеспособные бактерии могли формировать колонии.

Более высокие показатели жизнеспособности в штаме дикого типа по сравнению с мутантом с дефицитом целлюлозы подчёркивают критическую роль целлюлозных фибрилл в стимулировании адгезии бактерий к поверхности корня.

Чтобы определить количество жизнеспособных бактерий у растений, выращиваемых в песке, начните с удаления герметичного материала с верхней и нижней части контейнера.

Поставьте контейнер на лист стерильной бумаги и аккуратно постучите ею по поверхности, чтобы разгладить песок, а затем аккуратно поднимите песок с растением из контейнера.

Когда цилиндр песка и растение свободны на бумаге, разделите песок пополам, чтобы показать корень растения. Если хотите, возьмите образцы песка как у края контейнера, так и у корня. Это может быть полезно для определения распространения, накопления и роста бактерий.

Поднимите корень и удалите песок и бактерии, которые слабо прилипли, окунув корень в отмеренный объём воды или буфера и аккуратно встряхнув. Определите жизнеспособное количество клеток бактерий в полученной суспензии, покрывая их подходящим материалом, таким как Luria agar. Это отражает количество бактерий, слабо связанных с корнем. Наконец, удаляйте плотно связанные бактерии с помощью соника и определите их численность.