Иммунокрашивание микропоражений, наполненных бактериями, в срезе сердечной ткани мыши для визуализации

Начните с слайда с химически фиксированным срезом сердечной ткани мыши, инфицированной Streptococcus pneumoniae, патогенной бактерией.

Эта инфекция вызывает образование внеклеточных, наполненных бактериями микропоражений в сердечных мышцах.

Промой участок буфером, чтобы удалить остатки фиксативного средства.

Нанесите неионный детергент для проницаемости клеточных мембран хозяина.

Постирайте ещё раз, чтобы убрать остатки моющего средства.

Инкубировать секцию блокирующим агентом для блокировки неспецифических сайтов связывания.

Прополоскайте, чтобы удалить незавязанный блокирующий агент.

Введите первичное антитело, которое связывается с капсулярным полисахаридом бактерий.

Промыйте для удаления несвязанных антител, затем добавьте зелёное вторичное антитело, маркированное фторфором, которое связывается с первичным антителом.

Контрокрашивание ядерным красителем для маркировки ядер клеток хозяина.

Промыйте участок и закрепите с помощью монтажного материала.

Изучайте участок с помощью конфокальной микроскопии, чтобы визуализировать помеченные бактерии внутри микропоражений.

Используя 5-микронную кардиологическую секцию на положительно заряженных стеклянных стеклах, сначала заморозьте секции, затем ра