Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:03 мин. • February 26th, 2026
Начните с селезёнки мыши, предварительно инфицированной патогенными бактериями.
Поместите селезёнку в холодный фосфат-буферный физиологический раствор, чтобы сохранить жизнеспособность бактерий.
С помощью гомогенизатора гомогенизируйте селезёнку, чтобы механически её разрушить и выпустить внутриклеточные бактерии в буфер.
Это создаёт бактериальную суспензию, отражающую общую бактериальную нагрузку внутри селезёнки.
Проведите серийное разбавление гомогената для снижения плотности бактерий в растворе для точного определения количества бактерий.
Далее возьмите питательную агарную пластину, разделённую на две части.
Нанесите одинаковое разбавление бактерий на каждую часть агарной пластины для получения репликатов.
Дайте тарелке высохнуть, затем переверните её и инкубируете. Во время инкубации жизнеспособные бактерии размножаются и образуют отдельные колонии.
Подсчитайте колонии в каждом участке пластины, чтобы рассчитать средние единицы формирования колоний (CFU), которые отражают общую бактериальную нагрузку в селезёнке во время инфекции.
Селезёнка в 15-миллилитровой трубке с двумя миллилитрами PBS. Далее используйте отдельные одноразовые гомогенизаторы на каждый образец для мацерации тканей на льду, после чего следует серийное разбавление тканевых суспензий.
Разведите разбавления в дублировании на разные стороны одной пластины TSA и дайте образцам ненадолго высохнуть. Затем инвертируйте пластины и культивируйте образцы в статическом инкубаторе при температуре 37 градусов Цельсия на ночь, усредняя количество бактериальных колоний с обеих сторон пластины и каждого разбавления на следующее утро.