Подготовка бактериальных биопленочных колоний для морфологического анализа

Начните с бактериальных биопленочных колоний, выращиваемых на питательной пластине агара.

Эти биопленки состоят из гидрофобного внеклеточного матрикса, который защищает инкапсулированные бактерии от иммунных ответов хозяина.

Добавьте фиксатор и аккуратно поверните пластину, пока биопленка не начнёт плавать.

Запечатайте пластину и инкубуйте с помощью аккуратного встряхивания, чтобы сохранить структуру биопленки.

Удалите фиксатор, добавьте буфер и инкубируйте, чтобы стабилизировать структуру биопленки.

С помощью пипетки Пастера аккуратно отделите колонию от агара.

Добавьте увеличивающиеся концентрации этанола для обезвоживания бактериальных колоний.

Перенесите плавающую колонию на фильтрующую бумагу, пропитанную этанолом, и высушите на воздухе в закрытой камере.

Крепите высушенные колонии на карбон с углеродным покрытием и мост с углеродной лентой, чтобы предотвратить зарядку, вызванную электронным лучом.

Далее покройте биопленку проводящим металлическим слоем для усиления контраста изображения.

Биопленка теперь готова к морфологическому анализу с помощью электронной микроскопии.

Для начала фиксации образца сначала подготовьте достаточно свежего фиксирующего раствора для нужного количества коло