Метод камерного стекла для in vitro формирования бактериальной биопленки

Возьмём культуру бактерий, образующих биопленку, выращиваемых в питательных веществах среде.

Разведите культуру в свежих средах и инкубуйте с помощью встряхивания, чтобы стимулировать рост бактерий до достижения нужной концентрации.

Далее добавьте культуру в свежую среду, обогащённую фильтратами мокроты, полученной пациентами при муковисцидозе.

Эти фильтраты содержат факторы, полученные от хозяина, которые готовят бактерии к образованию биопленки.

Поместить подготовленную суспензию в колодцы камерного стекла и инкубировать статически, чтобы бактерии могли прикрепиться к поверхности стекла.

После инкубации удалите среду и аккуратно промывайте колодцы свежими средствами, чтобы устранить неприлипшие бактерии.

Добавьте свежую среду с фильтратом мокроты в колодцы и снова статично инкубируете камеру.

Во время инкубации факторы, полученные от хозяина, в среде активируют бактериальные сигнальные пути, которые запускают производство внеклеточного матрикса и способствуют развитию структурированной биопленки.

Биопленка готова к дальнейшему анализу.

Поместите 40 микролитров ранее подготовленной культуры в 4 миллилитра свежего бульона Лурия, или LB-среды, и вырастите бактерии, чтобы получить культуру с