Конфокальная визуализация бактериальных биопленок, вызванных фильтратами мокроты у пациентов с муковисцидозом

Инкубировать камерное стекло с прилипшими бактериями в среде с добавлением фильтрата мокроты, полученной пациентами при муковисцидозе, и только в этой среде.

Фильтрат мокроты содержит компоненты, полученные от хозяина, которые стимулируют бактериальные сигнальные пути, стимулируя образование матрицы и формирование биопленки.

После образования биопленок отбрасывайте среду, содержащую свободно плавающие бактерии и остаточные компоненты, производные от хозяина.

Мойте с помощью буфера, чтобы удалить слабо прикреплённые бактерии.

Добавьте окрашивающую смесь, содержащую мембранопроницаемые и мембранно непроницаемые флуоресцентные красители, и инкубуйте в темноте.

Мембранопроницаемый краситель пересекает целые мембраны, помечая как жизнеспособные, так и нежизнеспособные бактерии. В отличие от этого, непроницаемый краситель попадает только в повреждённые мембраны, избирательно маркируя нежизнеспособные бактерии.

После инкубации удалите раствор для окрашивания и смойте буфером, чтобы удалить избыток красителя и уменьшить фоновый флуоресцентный эффект.

Добавьте свежий носитель и получите изображения с помощью конфокальной микроскопии.

Биопленки, выращенные с помощью фильтрата мокроти, имеют увеличен