Количественная оценка Clostridium difficile в образцах кала из модели инфицированных мышей

Начнём с мыши, у которой желудочно-кишечный тракт колонизируется Clostridium difficile — анаэробным спорообразующим бактериальным патогеном.

Удержите мышь и дайте ей естественным образом испражниться в стерильную, заранее взвешенную трубку.

Определите чистый вес образца фекалий, вычитая вес пустой пробирки из общего веса, чтобы подготовить соответствующие разбавления.

Переместить образец в анаэробную среду для сохранения жизнеспособности кислородочувствительной бактерии.

Добавьте буфер к образцу и механически нарушите его, чтобы выпустить содержимое в суспензия.

Инкубировать так, чтобы крупные обломки осели, сохраняя бактериальные клетки и споры в наднатерянном.

Проведите последовательные разбавления супернатанта в буфере.

Разбавляйте на селективные среды и инкубируют в анаэробных условиях.

Среда способствует прорастанию спор и селективному росту Clostridium difficile , одновременно подавляя конкурирующие бактерии, что приводит к образованию отдельных колоний.

Подсчитайте колонии для количественной оценки нагрузки Clostridium difficile в фекалиях и оцените колонизацию желудочно-кишечного тракта.

Чтобы собрать образцы фекалий у мышей для оценки, сначала слегка, но твёрдо удерживать мышь за об