JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:26 мин • March 31st, 2026
Возьмём анестезиированную личинку данио-рерио, находящуюся в бороздке агарозной плесени. Головка расположена вверх под углом для доступа кишечника во время инъекции.
Покройте её малоплавящей агарозой, затем дайте агарозе затвердеть и обездвижить личинку.
Возьмите микроинъекционную иглу с патогенными бактериями, взвешенными в растворе красителя.
Под стереомикроскопом расположите иглу под углом и проведите её через агарозу в рот личинки.
Продвигайте его через пищевую трубу в кишечник.
Введите бактерии в просвет кишечника и подтвердите доставку с помощью красителя-трассера. Этот неинвазивный метод, называемый микрогаважем, имитирует естественный путь инфекции.
Убери иглу. Нарежьте агарозу и переложите личинку в свежий материал.
Бактерии размножаются и высвобождают токсины, повреждающие кишечный эпителий, способствуя бактериальному вторжению и колонизации в более глубокие ткани.
Модель заражения данио-рерио готова к анализу.
В 1,5% агарозной пластине с канавками нанесите каплю 0,8% низкоплавящего агарозы на личинки данио-рерио, чтобы покрыть её.
Аккуратно отрегулируйте личинки так, чтобы головы стояли вертикально под углом 45 градусов в канавке и хвосты прижались к стенке канавки. Аккуратно проведите иглой через агарозу, затем в рот личинок данио-рерио, через пищевод. Когда кончик иглы окажется внутри передней части кишечника, нажмите на педаль инъекции, чтобы выделить 0,5–1 нанолитр бактериальной культуры.
Заполните просвет кишечника. Не позволяйте ему переполняться из пищевода или клоаки. Аккуратно вынимите иглу изо рта данио-рерио. После гаважа спасите заражённые личинки данио-рероа от агарозы с помощью гибкого наконечника микрозагрузчика, сначала отрезав агарозу, затем подняв личинки.