Высокопроизводительная визуализация внутриклеточной инфекции Brucella abortus в эпителиальных клетках хозяина

Начните с эпителиальных клеток, в которых экспрессия интерферонного адаптерного белка, ключевого посредника врожденного иммунитета, была снижена, что делает клетки более восприимчивыми к инфекции Бруцеллой .

Замените среду на инфекционную среду, содержащую зелёный флуоресцентный белок, экспрессирующий Brucella abortus, факультативный внутриклеточный патоген, в нужной концентрации.

Центрифугуйте пластину для стимулирования контакта между бактериями и клетками хозяина, затем инкубируют для внутренней интернализации бактерий.

Промывайте клетки средой с сывороткой и обработайте их антибиотиком для уничтожения внеклеточных бактерий.

Инкубировать дальше, чтобы Brucella могла размножаться внутриклеточно.

Промыйте клетки буфером и закрепите их параформальдегидом для сохранения внутриклеточных структур.

Смойте лишний фиксатор. Затем добавьте буфер с детергентом для проницаемости клеток.

Смойте остаточное моющее средство, затем добавьте DAPI, чтобы окрасить ядра и выполните финальную промывку.

С помощью автоматического микроскопа получите высокопроизводительные изображения инфекции Бруцеллой в эпителиальных клетках хозяина.

Используя автоматическую мойку пластин, замените трансфекционную среду на 50