JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:32 мин • March 31st, 2026
Начните с саженцев Arabidopsis thaliana , выращиваемых на опорах низкой плотности, которые плавают на поверхности жидкой среды в безпочвенной системе.
Эти саженцы были предварительно инокулены бактериями, которые колонизируют корень и образуют биопленку.
Держите саженец и аккуратно щипните стебель под листьями щипцем.
Затем снимите саженец из сетки, не повредив корень, сохранив колонизированную структуру корня.
Переложите саженец в многоколодическую пластину с двойной дистиллированной водой.
Накройте пластину фольгой и соникуйте образцы с помощью многоступенчатого соникатора, чтобы разрушить биопленку и вытеснить бактерии с корня.
После соникации используйте соникированную бактериальную суспензию для подготовки последовательных разбавлений.
Разбавленные образцы наложите на агарные пластины и добавьте стеклянные шарики, чтобы равномерно распределить бактерии.
Удалять бусины и инкубировать пластины, чтобы жизнеспособные бактерии могли образовать колонии.
Формирование колоний подтверждает успешную колонизацию корней бактериями в безпочвенной системе.
После промывания удалите сеянцы из сетки, аккуратно положив под листья простерилизованные пламенем щипцы на стороне сетки. Слегка щипните стебель и поднимите сеянцы вверх и прочь от сетки, чтобы вытащить корень, не сломав его. Чтобы удалить бактерии из корней растений, переместите саженцы из каждой сетки в отдельные колодцы с 24-луночной соникационной пластиной, содержащей один миллилитр двойной дистиллированной воды.
Соник всех образцов внутри пластины одновременно, используя многопрофильный соникатор, как описано в рукописи. Для количественной оценки бактерий проводите серийное 10-кратное разбавление сониковых образцов в бактериальной среде роста. Распространять с помощью стерильных стеклянных бусинок и инкубировать при оптимальной температуре для бактерий, пока отдельные колонии не станут счётными.