Фотоотбеливающие цианобактериальные пигменты для визуализации белков, регулирующих рост,

Начните с фиксированных, обездвиженных и проницаемых цианобактериальных клеток, приклеенных к покрытию.

Эти цианобактериальные клетки экспрессируют белки, регулирующие рост с низким количеством.

При высокоразрешающей флуоресцентной визуализации естественные светочувствительные пигменты внутри цианобактериальных клеток излучают фоновую флуоресценцию.

Это снижает качество изображения при визуализации этих белков с низким содержанием.

Чтобы минимизировать фоновое флуоресцентное тепло, поместите покров с цианобактериальными клетками в окрашивающую чашу.

Добавьте блокирующий буфер с белками сыворотки для предотвращения связывания неспецифических антител при последующей обработке и детергентный препарат для поддержания проницаемости клеток.

Поставьте чашу для окрашивания на лёд и подвергите клетки интенсивному ксеноновому свету.

Высокоинтенсивный свет инициирует фотоотбеливание, разрушая светочувствительные пигменты, в то время как белки, регулирующие рост с низким содержанием, остаются незатронутыми.

Холодные условия минимизируют повреждения от жары и сохраняют целостность клеточной клетки.

Этот процесс позволяет чётко визуализировать белки с низким количеством и регулирующим рост с помощью иммунокрашивки при высокоразрешающей флуоресцентной микроскопии.

Переложите вымытый чехол в маску с пятнами.

Добавьте 50 микролитров блокирующего буфера на верхнюю часть покрытия. Поместите всю морильную чашу на лёд, а затем переместите её под источник ксенона для фотоотбеливания минимум 60 минут. После фотоотбеливания и блокировки используйте край бумажного полотенца, чтобы удалить буфер блокировки.