Обнаружение восприимчивости бактериальных антибиотиков с помощью стимулированного рамана-рассеяющего микроскопа

Начните с образцов бактерий, предварительно обработанных с увеличением концентрации антибиотика, который уничтожает восприимчивые бактерии.

Добавьте в соответствующие пробирки среду с оксидом дейтерия и той же концентрацией антибиотика.

Инкубировать трубки в условиях встряхивания.

Оксид дейтерия попадает в бактериальные клетки, где дейтерий интегрируется в недавно синтезированные биомолекулы, образуя углеродо-дейтерийные связи.

Открутите бактерии, выбросьте супернатант и помойте.

Добавьте фиксатор для сохранения структуры бактерий.

Добавьте воду, центрифугу и удалите супернатант.

Суспензируйте бактерии и перенесите суспензию на стекло с поли-L-лизином, затем запечатайте его.

Поместите образец на стадию предварительно откалиброванного стимулированного рамановского рассеяния или SRS-микроскопа. Добавьте воды и уменьшите объектив.

Получите изображения нескольких полей для оценки частоты колебаний углерод-дейтерий.

При более высоких концентрациях антибиотиков сигнал углерод–дейтерий снижается, что указывает на снижение жизнеспособности бактерий.

Это позволяет быстро оценить восприимчивость к антибиотикам, корреляция интенсивности сигнала SRS с жизнеспособностью бактерий.

После 1 часа инкубации доб