Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:29 мин. • March 31st, 2026
Возьмите каплю бактериального патогена на парафиновую плёнку.
Поместите личинку дрозофилы в бактериальную каплю.
Под стереомикроскопом используйте вольфрамовую иглу, чтобы уколоть личинку и проколоть кутикулу, защитный внешний слой и подлежащий эпидермис.
Это позволяет бактериям проникать в гемолимфу личинок — кровоносную жидкость.
Переместите заражённые личинки на борозеную, богатую питательными веществами агарную пластину, содержащую дрожжевую пасту в качестве источника пищи.
Борозды способствуют миграции личинок и предотвращают обезвоживание.
Добавьте оставшуюся бактериальную суспензию на пластину и запечатайте её парафиновой пленкой.
Инкубировать пластину во влажной камере для поддержания жизнеспособности личинок.
Внутри гемолимфи личинки иммунные клетки, называемые гемоцитами, обнаруживают бактерии и инициируют фагоцитоз.
Некоторые бактерии устраняются после слияния фагосома и лизосомы, другие выживают, задерживая слияние или сопротивляясь внутриклеточному стрессу, и размножаются внутри гемоцитов, что приводит к продолжительной внутриклеточной инфекции.
Инфицированные Drosophila larvae теперь готовы к исследованиям взаимодействия хозяина и патогена.
Положите дрожжовую пасту на тарелку с виноградным соком агар. Сделайте мелкий разрез в агаре, где личинки смогут мигрировать, чтобы избежать высыхания.
Собрать стрелку из вольфрама диаметром 0,001 миллиметра с удерживающими щипцами с помощью парафиновой плёнки. Пипетта 50 микролитров высокотитрового C, экспрессирующего mCherry. Burnetii нанесите на парафиновую пленку под стереомикроскопом и поместите личинок в бассейн бактерий. Проколите личинку вольфрамовой иглой.
Переложите личинок на агарную тарелку. Перенесите оставшуюся патогенную среду на агарную пластину и запечатайте её керофиновой пленкой. Держите личинок на тарелке во влажном воздухе до желаемого времени после заражения. Оставь букву C. Burnetii заражали личинок на пластине в течение 24 часов.