Высокоразрешающая конфокальная визуализация гемоцитов Drosophila , инфицированных патогенами

Поставьте стекло с фиксированными гемоцитами на стадию конфокального микроскопа.

Эти гемоциты получаются из личинок Drosophila melanogaster и были инфицированы бактериальным патогеном.

Гемоциты маркированы зелёным флуоресцентным белком, их ядра окрашены синим красителем, а бактерии экспрессируют красный флуоресцентный белок для визуализации.

Настройте микроскоп так, чтобы обнаруживать все три флуорофора для одновременного отслеживания клеточных компартментов и патогенов.

Используя объектив высокого разрешения, сосредоточьтесь на целевом гемоците, чтобы зафиксировать субклеточные детали.

Регулировать мощность лазера и усиление детектора для достижения нужной экспозиции образца и оптимизации чёткости сигнала.

Отсканируйте несколько Z-плоскостей, чтобы убедиться, что уровень экспозиции соответствует норме.

Настройте верхнюю и нижнюю Z-позиции так, чтобы снимать всю гемоцит.

Используйте сканирующий зум, чтобы изолировать интересующий гемоцит и получить высококачественное 3D-изображение.

Этот метод позволяет визуализировать локализацию патогена внутри гемоцита.

Настройте конфокальный микроскоп для трёхцветной съёмки DAPI, EGFP и mCherry.

Поместите образец на микроскоп и сфокусируйтесь на нём с пом