Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:35 мин. • March 31st, 2026
Поставьте стекло с фиксированными гемоцитами на стадию конфокального микроскопа.
Эти гемоциты получаются из личинок Drosophila melanogaster и были инфицированы бактериальным патогеном.
Гемоциты маркированы зелёным флуоресцентным белком, их ядра окрашены синим красителем, а бактерии экспрессируют красный флуоресцентный белок для визуализации.
Настройте микроскоп так, чтобы обнаруживать все три флуорофора для одновременного отслеживания клеточных компартментов и патогенов.
Используя объектив высокого разрешения, сосредоточьтесь на целевом гемоците, чтобы зафиксировать субклеточные детали.
Регулировать мощность лазера и усиление детектора для достижения нужной экспозиции образца и оптимизации чёткости сигнала.
Отсканируйте несколько Z-плоскостей, чтобы убедиться, что уровень экспозиции соответствует норме.
Настройте верхнюю и нижнюю Z-позиции так, чтобы снимать всю гемоцит.
Используйте сканирующий зум, чтобы изолировать интересующий гемоцит и получить высококачественное 3D-изображение.
Этот метод позволяет визуализировать локализацию патогена внутри гемоцита.
Настройте конфокальный микроскоп для трёхцветной съёмки DAPI, EGFP и mCherry.
Поместите образец на микроскоп и сфокусируйтесь на нём с помощью цифрового апертурного объектива 63X/1.4. Определите нужные гемоциты в поле зрения для визуализации. Затем отрегулировать мощность лазера и усиление детектора, чтобы получить правильную экспозицию образца.
Проверьте несколько плоскостей Z, чтобы убедиться, что уровень экспозиции соответствует всей толщине образца. Далее найдите верхнюю и нижнюю позиции на оси Z целого гемоцита. Установите эти позиции как начальную и конечную позиции для Z-секционирования.
Используйте сканирующий зум, чтобы сфотографировать область с гемоцитом. Соберите серию изображений с соответствующим разрешением, например, 1024 на 1024 пикселя в плоскости X-Y и расстояние 0,3 микрометра в измерении Z.