$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Начинайте с небольших кусочков охлаждённой ткани листьев, в которых флоэма заражена бактериальным патогеном.
Поместите их в ступку с жидким азотом, чтобы подавить активность нуклеаз, разрушающих ДНК.
Перемол, чтобы механически нарушить работу клеток и высвобождать внутриклеточные компоненты.
Используйте охлаждённую лопатку для перемещения порошка, добавьте буфер для лизиса и создайте вихрь суспензии.
Инкубировать для лизирования ядер растений и бактериальных клеток, высвобождая ДНК и РНК при денатурировании белков.
Добавьте РНКазу и инкубируйте для деградации РНК.
Добавьте буфер осаждения белков для агрегирования, затем центрифугу для их разделения.
Перенесите ДНК растений и бактерий с надёжным соперником в изопропанол, чтобы осадить ДНК в виде нитевидных цепей.
Центрифугу для сбора ДНК и отбросить супернатант.
Промыйте этанолом, затем центрифуга, а затем сбросьте супернатант.
Высушите ДНК на воздухе, затем добавьте буфер для регидратации и инкубуйте для растворения.
Образцы ДНК теперь готовы к дальнейшему обнаружению патогенов на основе ПЦР.
Используйте чистые ножницы, чтобы отрезать целый свежий лист цитрусового дерева и положить его в чистый пластиковый пакет для сэндвичей. Затем охладите ступку с пестиком, добавив небольшое количество жидкого азота. Затем ножницами нарежьте небольшие кусочки ткани листьев, примерно один квадратный дюйм.
Положите кусочки листьев в ступку, чтобы сразу их заморозить. Быстро начинайте измельчивать ткань листьев в ступке, пока жидкий азот не испарится, и не останется мелкий зелёный порошок. Затем охладите металлическую лопатку в жидком азоте на 10–15 секунд. Затем используйте холодную лопатку, чтобы зачерпнуть молотую ткань из раствора в микроцентрифугной трубке объёмом 1,5 миллилитра. Используйте пипетку объемом 1000 микролитров, чтобы добавить 600 микролитров раствора лизиса ядер в образец. Затем закрутите образец в течение одной-трёх секунд. Инкубировать трубку при 65 градусах Цельсия в водяной бане в течение 15 минут.
После окончания инкубационного периода используйте пипетку объемом 10 микролитров, чтобы добавить 3 микролитра раствора РНазы в лизат для удаления РНК. Затем смешайте содержимое трубки, перевернув её два-пять раз. Инкубировать при 37 градусах Цельсия в течение 15 минут в шкаф-инкубаторе. Через 15 минут добавьте в образец 200 микролитров раствора белка для осадки. Закрутите трубку на высокой скорости на 20 секунд.
Затем центрифугуйте образец при 13000 г в течение 3 минут. Во время центрифугирования добавьте 600 микролитров изопропанола, поддерживаемого при комнатной температуре, в новую микроцентрифугную трубку объемом 1,5 миллитра. После завершения центрифугирования аккуратно удалите супернатант из трубки центрифуги в трубку с изопропанолом. Выбросьте шарики.
Инвертируйте трубку, чтобы ДНК была видна как ниточная нить. Затем центрифугуйте образец при 13000 г в течение минуты при комнатной температуре.
Декантировать супернатант после центрифугирования. Затем добавьте 600 микролитров этанола 70% в гранулу. Переверните трубку несколько раз, чтобы промыть гранулы. Центрифугуйте трубку при 13000 г на 1 минуту. После завершения центрифугирования аккуратно аспирируйте супернатант. Затем переверните тюбик с открытой крышкой на впитывающей бумаге, чтобы она высохла на воздухе 15 минут. После высыхания добавьте 100 микролитров раствора для регидратации ДНК в гранулу. Инкубировать суспензию ДНК при 65 градусах Цельсия в водяной бане в течение часа.