Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:24 мин. • August 31st, 2026
Начните с глаза трансгенной мыши, которой ранее был введен аденоассоциированный вирус (AAV), несущий интересующий ген, кодирующий флуоресцентный белок.
У данной мыши отсутствует ген, необходимый для поддержания целостности внутренней пограничной мембраны (ILM) — барьера, отделяющего сетчатку от стекловидной полости.
Потеря этого гена имитирует ретинальную дегенерацию, что позволяет вирусу проникать глубже в слои клеток сетчатки.
Инфицированные клетки сетчатки экспрессируют интересующий ген, вырабатывая флуоресцентные белки, что позволяет им флуоресцировать.
Теперь препарируйте глаз, удалив роговицу и хрусталик.
Осторожно отделите сетчатку от ретинального пигментного эпителия (RPE) и склеры — внешнего слоя глаза.
Погрузите ткань в фиксатор.
Промойте фосфатным буфером для удаления остатков фиксатора.
При наблюдении под конфокальным микроскопом флуоресценция в клетках сетчатки указывает на успешное проникновение вируса через поврежденную внутреннюю пограничную мембрану.
Для подготовки плоских препаратов сетчатки облегчите диссекцию, фиксируя энуклеированные глаза в 4% параформальдегиде в течение 15–30 минут. Данная фиксация, а также последующая фиксация после диссекции должны быть проведены на
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео