JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:29 мин • August 31st, 2026
Возьмите личинок комаров раннего возраста, которые восприимчивы к вирусной инфекции.
Перенесите личинки в стакан с деионизированной водой.
Введите рекомбинантный денсовирус, сконструированный для кодирования микроРНК, подавляющей целевые гены личинок. Инкубируйте.
Личинки поглощают вирус, который затем попадает в кишечник.
Проглоченный вирус преодолевает эпителий кишечника и распространяется в другие ткани.
Вирус проникает в клетки личинок посредством эндоцитоза и высвобождает свою ДНК в ядро.
Вирусная ДНК продуцирует микроРНК.
В цитоплазме эти микроРНК связываются с РНК-индуцированным комплексом silencing (RISC).
Комплекс связывает и расщепляет комплементарные целевые мРНК личинок, предотвращая экспрессию и приводя к сайленсингу генов.
После инкубации промойте личинок деионизированной водой, чтобы удалить не поглощенные вирусные частицы.
Перенесите личинок в новую чашку с кормом для восстановления.
Личинки комаров, инфицированные вирусом с сайленсингом целевого гена, готовы к последующему использованию.
Промойте 100 личинок A. albopictus первого возраста трижды, используя деионизированную воду. Затем перенесите личинок в стакан, содержащий 95 миллилитров деионизированной воды.
Добавьте 5 мл стоков rAaeDV и инкубируйте личинок в течение 24 часов при 28 °C. Для успешного заражения личинок крайне важно, чтобы они находились в контакте с инфекционными вирусными частицами от 24 до 36 часов для обеспечения высокого процента заражения. После инкубации промойте личинок трижды деионизированной водой, а затем перенесите их обратно в чашки. Кормите личинок регулярно.