Visualizing Dose-Dependent Spike Protein Uptake with Quantum Dot Conjugates

JoVE Encyclopedia of Experiments

Микробиология

0 просмотров • 2:46 мин • July 31st, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Begin with a multi-well plate containing a culture of adherent mammalian cells.

These cells are engineered to express the human angiotensin-converting enzyme 2 receptor, tagged with green fluorescent protein (ACE2-GFP).

Remove the culture medium.

Wash the cells with an imaging medium to eliminate residual culture medium.

Prepare serial dilutions of quantum dot-spike (QD-Spike), in the imaging medium supplemented with a blocking agent to minimize nonspecific binding.

QD-Spike mimics a pseudovirus composed of fluorescent quantum dots conjugated to coronavirus spike proteins.

Add each dilution to a separate well and incubate.

The spike proteins bind specifically to the ACE2-GFP receptors on the host cell membrane.

This interaction triggers receptor-mediated endocytosis, leading to QD-Spike internalization.

After incubation, use confocal imaging to capture intracellular fluorescence signals.

Higher concentrations of QD-Spike produce stronger intracellular fluorescence, confirming concentration-dependent spike binding.

Further, co-localization of QD-Spike with ACE2-GFP confirms receptor-mediated uptake.

To prepare 0.1% BSA, add 130 microliters of 7.5% BSA to 10 milliliters of imaging media in mix. For a 6.1 to three serial dilution and triplicate add 14.26 microliters of QD Spike to 285.74 microliters of the 0.1% BSA to make the highest concentration of 20 nanomolar.

Then add 100 microliters of 20 nanomolar or QD Spike to 200 microliters of 0.1% BSA to make the second delusion of 6.67 nanomolar QD Spike. Remove all spent media from each well with a multi-channel aspirator, wash once with a multi-channel pipette with 100 microliters of imaging media per well, then aspirate 100 microliters of the imaging media. Add back 50 microliters of QD Spike solution per well and incubate the plate for three hours in a humidified incubator at 37 degree Celsius with 5% carbon dioxide.

08:40

Производство Pseudotyped частиц для изучения патогенного коронавирус в условиях 2-го уровня биобезопасности

Похожие видео

0 Просмотры

06:03

Использование вирусных входных анализов и молекулярного стыковочного анализа для выявления противовирусных кандидатов против Коксакивируса A16

Похожие видео

0 Просмотры

08:13

Визуализация субклеточной локализации белка в сердце с помощью иммуномаркировки, опосредованной квантовыми точками, с последующей просвечивающей электронной микроскопией

Похожие видео

0 Просмотры

12:19

Отображение молекулярной диффузии в плазме мембраны Несколько-Target трассировки (MTT)

Похожие видео

0 Просмотры

13:06

Солюбилизации и Био-сопряжения квантовых точек и бактериальные анализы токсичности по кривой роста и плиты графа

Похожие видео

0 Просмотры

17:14

Компактный квантовых точек для одиночных молекул изображений

Похожие видео

0 Просмотры

04:59

Оценка внутриклеточного распределения конъюгатов антител, модифицированных вирусными пептидами

Похожие видео

0 Просмотры

10:16

Производство и таргетинг одновалентных квантовых точек

Похожие видео

0 Просмотры

10:56

Синтез Cd-фри InP / ZnS квантовых точек Подходит для биомедицинских применений

Похожие видео

0 Просмотры

11:16

Коррелятивное свето- и электронной микроскопии с помощью Quantum Dot Наночастицы

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 15 августа 2026