Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:28 мин. • August 31st, 2026
Возьмите культуру генетически модифицированных бактерий-спирохет. Эти бактерии несут ген устойчивости к гентамицину.
Добавьте суспензию бактериофага в бактериальную культуру.
Фаги несут плазмидную ДНК, кодирующую ген устойчивости к канамицину.
Проинкубируйте смесь.
Бактериофаг прикрепляется к поверхности бактерии и впрыскивает ДНК в клетку.
Плазмида реплицируется независимо и передается при делении бактерий.
Смешайте инкубированную культуру с расплавленной агарозной средой, дополненной антибиотиками гентамицином и канамицином.
Вылейте смесь в чашку. Дайте ей застыть, после чего поместите в инкубатор.
При селекции с использованием двух антибиотиков растут и образуют колонии только те клетки, которые несут оба маркера устойчивости, в то время как остальные клетки погибают.
Выберите колонию и инокулируйте ее в среду, содержащую оба антибиотика.
Проведите инкубацию для стимуляции роста бактерий с трансдуцированной плазмидой для последующего анализа.
Слейте супернатант и ресуспендируйте осадок в 14,5 мл свежей среды BSK. Добавьте не более 500 мкл образца фага, осажденного PEG, в культуру клона-реципиента.
После тщательного перемешивания инкубируйте при 33 °C в течение 72–96 часов. Проведите отбор т
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео