Доставка генов в кишечные органоиды мыши с использованием лентивирусных векторов
Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:30 мин. • August 31st, 2026
Начните с органоидов кишечника мыши, которые были частично диссоциированы для облегчения лентивирусной трансдукции.
Возьмите лентивирусные векторы в среде для трансдукции.
Лентивирус несет целевой ген для стабильной интеграции в геном хозяина.
Добавьте лентивирус в лунку.
Инкубируйте смесь, чтобы обеспечить проникновение вируса.
Вирусная РНК подвергается обратной транскрипции в ДНК и интегрируется в геном хозяина.
Добавьте среду для органоидов и перенесите смесь в пробирку.
Центрифугируйте для удаления всех несвязанных вирусов.
Смешайте осадок с матриксом базальной мембраны.
Поместите органоиды в лунку и дайте им затвердеть.
Матрикс образует сеть, которая удерживает органоиды и обеспечивает структурную поддержку.
Добавьте среду для культивирования органоидов, дополненную стимуляторами роста для поддержания пролиферации органоидов.
В результате получаются почкующиеся органоиды, содержащие трансдуцированный ген, которые могут быть использованы для дальнейшего функционального анализа.
Перенесите органоиды вместе с этим последним небольшим количеством среды в лунку 48-луночного планшета.
Добавьте предварительно подготовленный лентивирус с высоким титром в среде для трансдукции к органоидам и ресуспе
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео